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Table 4 Accuracy and precision parameters of the developed UHPLC–MS method

From: Determination of immunogenic proteins in biopharmaceuticals by UHPLC–MS amino acid analysis

 

Within-run, n = 6

Between-run, n = 12

Mean found concentration (µM)

RE (% Nom.)

RSD (%)

Mean found concentration (µM)

RE (% Nom.)

RSD (%)

Glycine

 5 µM

4.50

− 9.00

3.14

4.90

− 2.00

9.72

 50 µM

50.45

0.90

7.99

49.07

− 1.86

5.59

 250 µM

254.55

1.82

6.81

240.60

− 3.76

6.69

Alanine

 5 µM

4.70

− 6.00

3.01

4.55

− 9.00

8.98

 50 µM

49.25

− 1.50

0.43

48.87

− 2.26

1.70

 250 µM

256.30

2.52

2.59

247.52

− 0.99

3.05

Serine

 5 µM

4.55

− 9.00

7.77

4.68

− 6.40

6.39

 50 µM

49.15

− 1.70

2.45

48.45

− 3.10

4.04

 250 µM

253.50

1.40

2.79

253.1

1.24

2.77

Proline

 5 µM

4.80

− 4.00

2.95

4.78

− 4.40

2.78

 50 µM

49.90

− 0.20

7.09

50.63

1.26

3.85

 250 µM

259.75

3.90

2.37

252.35

0.94

3.77

Valine

 5 µM

4.78

− 4.4

5.51

4.73

− 5.40

4.56

 50 µM

48.90

− 2.20

2.60

50.65

1.30

4.12

 250 µM

249.85

− 0.06

0.25

245.90

− 1.64

2.00

Threonine

 5 µM

4.95

− 1.00

7.14

4.62

− 7.60

7.43

 50 µM

49.95

− 0.10

0.71

49.05

− 1.90

3.23

 250 µM

251.25

0.50

1.21

240.7

− 3.72

3.77

Cysteine

 2.5 µM

2.60

4.00

5.44

2.53

1.20

4.11

 25 µM

25.05

0.20

3.11

24.73

− 1.08

4.22

 125 µM

122.78

− 1.78

2.85

120.44

− 3.65

2.45

Isoleucine

 5 µM

5.05

1.00

1.40

4.98

− 0.40

3.90

 50 µM

49.60

− 0.80

3.42

50.45

0.90

2.73

 250 µM

258.35

3.34

4.79

247.37

− 1.05

4.24

Leucine

 5 µM

4.85

− 3.00

1.46

4.72

− 5.60

4.91

 50 µM

48.95

− 2.10

3.61

48.92

− 2.16

1.67

 250 µM

252.95

1.18

5.40

243.43

− 2.63

4.32

Asparagine

 5 µM

5.30

6.00

8.22

4.98

− 0.40

11.57

 50 µM

53.75

7.50

0.13

52.60

5.20

1.93

 250 µM

249.75

− 0.10

2.58

242.53

− 2.99

2.64

Aspartic acid

 5 µM

4.65

− 7.00

1.52

4.43

− 11.40

11.31

 50 µM

51.35

2.70

4.82

47.82

− 4.36

6.73

 250 µM

262.40

4.96

11.97

247.03

− 1.19

7.91

Glutamine

 5 µM

4.85

− 3.00

1.46

4.53

− 9.40

5.52

 50 µM

53.25

6.50

2.26

52.48

4.96

2.20

 250 µM

245.15

− 1.94

5.51

245.32

− 1.87

3.18

Lysine

      

 5 µM

4.95

− 1.00

6.70

4.85

− 3.00

6.22

 50 µM

52.00

4.00

1.90

51.62

3.24

3.29

 250 µM

252.70

1.08

0.39

246.60

− 1.36

3.71

Glutamic acid

 5 µM

4.75

− 5.00

1.49

4.67

− 6.60

1.75

 50 µM

50.20

0.40

8.48

48.28

− 3.44

4.07

 250 µM

261.10

4.44

6.07

260.27

4.11

3.15

Methionine

 5 µM

4.75

− 5.00

1.49

4.97

− 0.60

4.35

 50 µM

50.20

0.40

5.92

49.03

− 1.94

4.25

 250 µM

253.20

1.28

6.26

245.90

− 1.64

3.88

Histidine

      

 5 µM

4.63

− 7.40

10.65

4.72

− 5.60

9.40

 50 µM

50.60

1.12

2.80

49.05

− 1.90

4.71

 250 µM

251.70

0.68

2.59

249.07

− 0.37

2.22

Phenylalanine

 5 µM

4.85

− 3.00

1.46

4.80

− 4.00

1.86

 50 µM

47.85

− 4.30

4.29

46.45

− 7.10

3.56

 250 µM

258.00

3.20

1.21

249.48

− 0.21

3.79

Arginine

 5 µM

4.95

− 1.00

4.29

4.62

− 7.60

7.17

 50 µM

48.45

− 3.10

2.19

48.77

− 2.46

6.86

 250 µM

258.15

3.26

0.36

245.08

− 1.97

5.06

Tyrosine

 5 µM

4.77

− 4.60

1.21

4.63

− 7.40

3.53

 50 µM

49.30

− 1.40

3.44

47.22

− 5.56

4.11

 250 µM

256.05

2.42

6.43

246.23

− 1.51

5.26

Tryptophan

 5 µM

5.15

3.00

1.37

4.98

− 0.40

6.14

 50 µM

49.55

− 0.90

2.14

50.40

0.80

2.70

 250 µM

263.90

5.56

9.59

254.52

1.81

5.57